做電泳跑page、提取質粒、做WESTERN BLOT時注意點

做電泳跑page、提取質粒、做WESTERN BLOT時注意點 | 時間: May-7 13:46:55 | 分類:技術欄目

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做電泳時注意容易出問題，以下問題要注意

1. 跑page膠的時候

小電壓跑會避免高電壓產生的熱量爾導致的膠層變形。低電壓泳道會比大電壓泳道跑的直一些，且分離效果更高，有利于分子量相差不大的蛋白分離。

2. 提取質粒的時候

較后一步的酒精揮發很關鍵，基本上是其后續的酶切反應的決定性因素。所以這一步盡量揮發長一點時間，較好是空調吹熱風，或是37度溫箱放長一點的時間，我試過室溫過夜，酶切很好。

3. 做WESTERN BLOT 的時候

大家往往會摸索一抗、二抗的濃度，封閉時間，曝光時間等等，而每次變換其中的一個條件就需要從新跑膠、轉膜，甚至重新提蛋白，這樣會浪費大量的時間。其實完全沒有必要這樣。一次轉膜后，將PVDF膜晾干，裁減成小塊，保存起來，用的時候取出一塊，沒有任何影響。這對于摸索條件的戰友來說，節約了大量的時間。