DNA Marker產(chǎn)品選擇指南
DNA Marker產(chǎn)品選擇指南 | 時間: December-16 12:50:33 | 分類:技術欄目
凌儀生物專業(yè)提供高速離心機，美國Bio-rad伯樂電泳儀，德國eppendorf艾本德移液器，PCR基因擴增儀，雅培原位雜交儀，Thermo熱電離心機等實驗室儀器設備，要省錢，別錯過哦。1.Marker選擇標準
（1）應選擇在目標片段大小附近ladder較密的marker，這樣對目標片段大小的估計較準確。
（2）所選marker應能清楚反映目標片段的大小，且次要片段大小也能反映出來。如作酶切鑒定時，目的片段和切后載體片段較好能在同一個marker中反映出來，若二者不能兼顧，將前者作為主要考慮要素。
2.常見問題分析
Q：為什么marker條帶非常模糊，無法辨別具體條帶？
A：出現(xiàn)上述情況，可能有以下幾個原因：1. marker條帶出現(xiàn)了降解。請確保在使用過程中避免核酸酶污染；2. 電泳緩沖液陳舊。電泳緩沖液多次使用后，離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液；3. 電泳條件不合適。電泳時電壓應不超過20V/cm，溫度應低于30℃；4. marker上樣量過多。請根據(jù)說明書選用合適上樣量；5. 凝膠質量不好。建議使用質量較好的瓊脂糖；此外，凝膠凝固不均勻也會導致條帶模糊。
Q：為什么marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則的條帶（如啞鈴狀等）？
A：出現(xiàn)上述情況，多與以下幾個原因有關：1. 電泳緩沖液陳舊。老化的電泳緩沖液離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液；2. 電泳條件不合適。電泳時電壓應不超過20V/cm，電壓太高可能也會導致marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則現(xiàn)象。此外，凝膠質量差以及凝膠冷卻時凝固不均勻也會導致該現(xiàn)象出現(xiàn)。
Q：為什么marker條帶非常弱或者根本沒有條帶？
A：出現(xiàn)上述情況可能是：1. marker上樣量較低，可適當增加上樣量；2. 凝膠質量較差或凝膠凝固不均勻也會導致電泳條帶弱或根本沒有條帶；3. 電泳時間過長導致marker條帶跑出凝膠，可縮短電泳時間，降低電壓，增加凝膠濃度。
Q：為什么marker缺帶？
A：對于含有較小片段的marker，如果出現(xiàn)缺帶現(xiàn)象，可能是因為：1. 小條帶跑出凝膠或分子量大小非常相近的條帶不易辨認所致，可適當縮短電泳時間，降低電壓，同時增加凝膠濃度；2. 凝膠中EB含量過低，導致大片段結合EB量太少或沒有，在紫外光下亮度太低，可適當增加EB用量。
Q：為什么marker條帶非常模糊，無法辨別具體條帶？
A：出現(xiàn)上述情況，可能有以下幾個原因：1. marker條帶出現(xiàn)了降解。請確保在使用過程中避免核酸酶污染；2. 電泳緩沖液陳舊。電泳緩沖液多次使用后，離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液；3. 電泳條件不合適。電泳時電壓應不超過20V/cm，溫度應低于30℃；4. marker上樣量過多。請根據(jù)說明書選用合適上樣量；5. 凝膠質量不好。建議使用質量較好的瓊脂糖；此外，凝膠凝固不均勻也會導致條帶模糊。
Q：為什么marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則的條帶（如啞鈴狀等）？
A：出現(xiàn)上述情況，多與以下幾個原因有關：1. 電泳緩沖液陳舊。老化的電泳緩沖液離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液；2. 電泳條件不合適。電泳時電壓應不超過20V/cm，電壓太高可能也會導致marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則現(xiàn)象。此外，凝膠質量差以及凝膠冷卻時凝固不均勻也會導致該現(xiàn)象出現(xiàn)。
Q：為什么marker條帶非常弱或者根本沒有條帶？
A：出現(xiàn)上述情況可能是：1. marker上樣量較低，可適當增加上樣量；2. 凝膠質量較差或凝膠凝固不均勻也會導致電泳條帶弱或根本沒有條帶；3. 電泳時間過長導致marker條帶跑出凝膠，可縮短電泳時間，降低電壓，增加凝膠濃度。
Q：為什么marker缺帶？
A：對于含有較小片段的marker，如果出現(xiàn)缺帶現(xiàn)象，可能是因為：1. 小條帶跑出凝膠或分子量大小非常相近的條帶不易辨認所致，可適當縮短電泳時間，降低電壓，同時增加凝膠濃度；2. 凝膠中EB含量過低，導致大片段結合EB量太少或沒有，在紫外光下亮度太低，可適當增加EB用量。
