原位雜交組織化學技術的由來及發展
原位雜交組織化學技術的由來及發展 | 時間: December-7 11:15:59 | 分類:技術欄目
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由于同位素標記探針具有放射性既污染環境，又對人體有害，且受半衰期限制等缺點，科學工作者們開始探索用非放射性的標記物標記核酸探針進行原位雜交。Bauman（1981）等首先應用熒光素標記cRNA探針做原位雜交，然后用熒光顯微鏡觀察獲得成功。Shroyer（1982）報道用2，4二硝基苯甲醛（DNP）標記DNA探針，使該DNA探針具有抗原性，然后用兔抗DNP的抗體來識別雜交后的探針，較后經免疫過氧化物酶的方法來定位雜交探針。這兩種方法至今仍有采用，但因敏感度不夠高，應用不夠普遍。
Pezzella（1987）創建了用磺基化DNA探針來做細胞或組織原位雜交的方法，其基本原理是使DNA探針的胞嘧啶堿基磺基化，利用單克隆抗體識別磺基化探針，再通過免疫組化方法顯示結合的單克隆抗體，從而對雜交結合的探針進行定位。本法的優點是磺基化DAN探針標記簡便，不需作缺口平移標記，敏感度也較高。但自生物素和高辛標記探針技術建立后，已有取而代之的趨勢。生物素標記探針技術是Brigat（1983）首先建立的，它利用生物素標記的探針在組織切片上檢測了病毒DNA，通過生物素與抗生物素結合，過氧化物酶-抗過氧化物酶顯示系統顯示病毒DNA在細胞中的定位。生物素標記探針技術目前已被廣泛應用，特別是在病毒學和病理學的臨床診斷中。這種生物素標記技術又叫酶促生物素標記技術。另一種叫光促生物素標記核酸技術，該技術是用光敏生物素（Photobiotin）標記核酸。目前應用的光敏生物素有乙酸鹽和補骨脂素生物素，它們都是由三個部分組成：光敏基團、連結臂和生物素（圖20-1）。在強光下，不需酶反應，光敏生物素的光敏基團即可與核酸中的堿基相結合。光敏生物素標記核酸，方法簡單，靈敏度也不低，但標記效率不高，每100～150個堿基才能標記一個生物素，對于短的基因探針特別是寡核苷酸探針不宜使用，以免因標記數過少而影響靈敏度（Forster et al 1985）。
