熒光顯微鏡檢測(cè)支原體
熒光顯微鏡檢測(cè)支原體 | 時(shí)間: December-7 11:30:41 | 分類:技術(shù)欄目
凌儀生物專業(yè)提供高速離心機(jī)，美國(guó)Bio-rad伯樂電泳儀，德國(guó)eppendorf艾本德移液器，PCR基因擴(kuò)增儀，雅培原位雜交儀，Thermo熱電離心機(jī)等實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備，要省錢，別錯(cuò)過哦。檢測(cè)支原體有兩種不同的策略:第一種方法將在下述方案中述及，利用對(duì)DNA染
色的熒光染料Hoechst 33258，它對(duì)細(xì)胞核周圍(在細(xì)胞表面或胞質(zhì)中)的特殊DNA物
質(zhì)進(jìn)行染色，可顯示支原體污染;第二種方法是利用D}LA探針識(shí)別細(xì)胞提取物中的
DNA支原體特異序列，進(jìn)行支原體污染的檢測(cè)。對(duì)這個(gè)方案，照試劑供應(yīng)商(Fisher
Scientific)的說明進(jìn)行。
1)準(zhǔn)備下列液體，然后除菌并冷藏。
無酚紅的HBSS
NaCI 8g
KCI 0.4g
葡萄糖1.0g
Hoecbot 10x1 x儲(chǔ)存液
溶解5mg Hoechst 3328于100mHBSS中，使其終濃度為5。
D.1mol/L檸檬酸22.2ml
用檸檬酸或N4調(diào)節(jié)pH為5.5
2)滴人1一2滴胰蛋白酶消化細(xì)胞于培養(yǎng)皿中的iWek玻片上或蓋玻片L}
3y加人1一2r}培養(yǎng)液覆蓋表面，讓細(xì)胞生長(zhǎng)2一3天。
4)準(zhǔn)備Cat}ay固定液(應(yīng)在每次用前制備新鮮的
3份甲醉
1份冰
5}吸干培養(yǎng)液，不用洗滌單層細(xì)胞并直接加人Carnoy固定液于La}tek室內(nèi)或培養(yǎng)皿中。培養(yǎng)皿中充滿Camoy固定液(約}III} } O室溫中放置平皿2分鐘去除培養(yǎng)皿中液體。加入新鮮固定液以充滿室內(nèi)或培養(yǎng)皿中(約5m1 }室溫中放
